TP: PCR (Polymerase Chain Reaction ou réaction de polyméraseen chaîne)

« SAFIEDDINE Compte rendu PCR Adam ISRAEL Noam Lors de ce TP nous allons expérimenter la PCR (Polymerase Chain Reaction ou réaction de polymérase en chaîne) : c’est une technique d'amplification d'ADN in vitro.

Elle permet d'obtenir un très grand nombre de copies d'une séquence d'ADN choisie.

La PCR est utilisée dans presque toutes les activités de base de la biologie moderne, mais également dans des applications dérivées, comme la détection de micro-organismes pathogènes, le diagnostic prénatal des maladies génétiques Objectif du kit : L’ensemble du kit permet de mettre en œuvre une amplification par PCR, pour découvrir et comprendre le principe de l’amplification d’un fragment d’ADN. Ce kit possède donc deux objectifs : le premier, découvrir et s’initier à l’utilisation d’une technique majeure de la biologie actuelle ; et le second, illustrer expérimentalement les mécanismes de la réplication de l’ADN.

Liste du matériel : -Thermocycleur -Gants -Feutre à pointe fine -4 µl d’ADN à amplifier -20 µl d’amorces AMP -20 µl de nucléotides +Taqpolymérase -Micropipette 2 - 20 µl - Cônes stériles -Microtube PCR 0,2mL -Témoin Méthode : La méthode utilisée est la PCR qualitative d’amplification de mode 1.

Ici la cible des amorces est le gène de résistance à l’ampicilline (AmpR), porté par un plasmide bactérien TOPO.

Si la réplication in vitro a bien lieu, l’électrophorèse permettra de mettre en évidence une bande d’environ 1 kpb correspondant au gène de l’ampicilline.

Concernant le protocole, il faut prélever puis mélanger dans un microtube, différentes substances tels que le PCR mix (nucléotides+ Taqpolymérase), les amorces AMP, et l’ADN à amplifier.

Ce tube est ensuite à déposer dans un thermocycleur qui va enchainer plusieurs cycles de températures différentes afin d’activer la réaction de PCR.

Enfin Résultat : Conclusion :. »