TP : l'action de l'amylase salivaire

« TP : l'action de l'amylase salivaire L’objectif du TP : tester la spécificité de substrat de l’amylase salivaire : On cherche à montrer qu'une enzyme est spécifique de son substrat, c'est-à-dire qu'elle n'agit que sur un substrat précis. Questionnement : Est-ce que l'amylase salivaire fonctionne uniquement sur l'amidon ? Hypothèse : On suppose que l'amylase est spécifique du substrat sur lequel elle agit (amidon), alors les autres substrats glucidiques (saccharose) ne doivent pas être hydrolysés en sucre simple par l'amylase. Protocole : - Préparer 2 tubes à essai : Tube 1 : 10 mL de solution d'amidon + 3 mL d’amylase Tube 2 : 10 mL de solution de saccharose + 3 mL d’amylase - Faire le test au Lugol et à la liqueur de Fehling sur les 2 tubes à t=0 min Placer les 2 tubes au bain-marie à 37°C Faire le test au Lugol et à la liqueur de Fehling sur les 2 tubes à t=5 min et t=10 min. Le test au Lugol permet de mettre en évidence la présence d’amidon.

En effet, en absence d’amidon le Lugol reste coloré en jaune-orangé et se colore en bleu en présence d’amidon. - Déposer quelques gouttes de la solution a tester dans le plateau de coloration et ajouter 1 goutte d’eau iodée. Le test à la liqueur de Fehling permet de détecter la présence de sucres simples (maltose).

En effet, la solution reste bleue en leur absence et devient un précipité rouge-brique en leur présence. - Prélever 2 mL de la solution à tester dans un tube à essai, ajouter 2 mL de liqueur de Fehling puis le placer au bain-marie à 80°C Les résultats de tests à la liqueur de Fehling : Les résultats de tests au Lugol : L’exploitation des résultats : Temps placés.... »