TP HISTOLOGIE

Ci-dessous un extrait traitant le sujet : TP HISTOLOGIE. Ce document contient 688 mots soit pages. Pour le télécharger en entier, envoyez-nous un de vos documents grâce à notre système gratuit d’échange de ressources numériques. Cette aide totalement rédigée en format PDF sera utile aux lycéens ou étudiants ayant un devoir à réaliser ou une leçon à approfondir en: Echange.

Fait le 15/11/2010
Préparation des coupes histologiques (2):
Avant de procéder à la découpe, nous devons faire une observation macroscopique de notre bloc.
Pour ma part mon bloc paraissait homogène, l’organe avait certainement dû bouger, j’avais une petite bulle d’air au sommet de mon bloc, il ne s’était pas trop creusé car j’ai fait un beau ménisque saillant.

Maintenant, nous allons avant de commencer à découper au microtome, couper notre bloc en biseau autour de l’organe, puis fixer un manche porte-bloc en le faisant chauffer au bec bunsen. On le tient dans la main et on le fixera sur la partie plate du bloc, il doit monter à une température de 40°C environ lorsque nous n’arrivons plus à le tenir tellement qu’il est chaud. A ce moment là, on le pose verticalement sur le bloc jusqu'à ce qu’il tienne. Puis on le met au réfrigérateur pour le refroidir.

Pour découper nos tranches fines d’organe, nous allons nous servir d’un Microtome manuel, fait en fonte. Cet appareil permet d’obtenir de fines tranches de matière. Le microtome est constitué d’une partie fixe : la lame de rasoir et d’une partie mobile : la crémaillère qui peut s’avancer ou se reculer en fonction de la place que prend le bloc pour pouvoir être coupé par la lame de rasoir, la crémaillère est composée d’une roue crantée et d’une bielle. Pour que cela marche nous devons entendre un bruit, plus il est fort, plus la roue avance vite, et plus les tranches sont fines. Pour faire tourner la roue, on a une manivelle dont le sens de rotation n’a aucune importante pour qu’il puisse s’adapter aux droitiers comme aux gauchers.

Apres avoir placé notre manche sur le bloc et de l’avoir passé au réfrigérateur, nous le plaçons dans une encoche de façon a bien le fixer, qu’il soit positionné de façon à être perpendiculaire à la lame. Nous pouvons commencer à découper la paraffine, on doit couper beaucoup de tranche de paraffine avant d’atteindre la pièce, cela s’appelle un dégrossissage.

Des que l’on a atteint la pièce, nous allons pourvoir faire des rubans de coupe. Ces rubans sont très fragiles, c’est pour cela que l’on les manipulera avec des pinceaux, des pinces pour ne pas les briser. Des que le microtome nous donne des rubans de coupes nous les étaleront sur une lame, il existe 2 méthodes :
• La 1ere méthode : Etalement sur plaque chauffante
_ Enduire la lame d’albumine (colle de blanc d’œuf) pour former une un film d’albumine en couche mince, se mettre au dessus de l’évier, incliner la lame vers le bas
_ Secher la lame
_ Verser une goutte d’eau distillée sur la lame
_ Placer le ruban délicatement sur la lame et mettre la lame sur une platine chauffante
_ Eliminer l’eau en inclinant la lame
_ Etuver à 55°C pendant 30min

• La 2nde méthode : Etalement au bain marie à 45-50°C , celle que l’on utilisera
_ Enduire la lame d’albumine
_ Sécher la lame
_ Etaler le ruban de coupe dans un bain marie d’eau >45°C
_ Récupérer le ruban avec la lame recouverte d’albumine par-dessous
_ Égoutter
_ Etuver à 55°C pendant 30min

Nous ferons 3 lames car nous aurons fait des rubans de coupes de plusieurs épaisseurs. Sachant que le microtome peut découper des épaisseurs de 1,5µm à 20µm. Nous découperons des rubans de 5 à 10 µm d’epaisseur.

La température de fusion de la paraffine est de 55°C

Pour faire cette manipulation, nous n’avons pas besoin de gants, il n’y a zéro risque, en matériels nous avons juste besoin de :
• Lame
• Albumine
• Pipette

De mettre les lames dans l’étuve pendant 30min permet à l’albumine de coaguler et de fixer les coupes à la lame