PRINCIPALES TECHNIQUES DE BIOLOGIEMOLECULAIRE ET EXEMPLESD'APPLICATION AU DIAGNOSTIC.
Publié le 22/05/2020
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PRINCIPALES TECHNIQUES DE BIOLOGIE
MOLECULAIRE ET EXEMPLES
DÕAPPLICATION AU DIAGNOSTIC.
I.
TECHNIQUES DE BASE.
A.
Extraction des acides nucliques.
1/ Extraction de lÕADN.Technique classique.
Les Kits.Il existe maintenant des kits qui permettent un gain de temps (Biosciences, AmershamÉ)
Ë partir de 5 ml de sang:
- Hmolyse des globules rouges
- Rcuprations des globules blancs en centrifugeant
- Elimination des protines avec une rsine qui contient des fonctions aldhides qui
forment un complexe avec les groupements NH2 des protines
- Elimination de la rsine et rcupration de lÕADN dans la phase aqueuse
- Prcipitation lÕEthanol.
-Qualit de lÕchantillon dÕADN: Il faut que le rapport DO
260/DO
280 soit compris entre 1,8 et
2.
Si il est inferieur 1,8, il reste trop de protines.
Si il est suprieur 2 lÕADN est dgrad.
Une dgradation de lÕADN peut tre observe apres lctrophorse sur gel dÕagarose
en prsence de BET.
Les petits fragments issus de la dgradation migrent loin.
-Quantification de lÕADN: 1 unit DO260nm correspond une concentration dÕADN de
50µg/ml.1/9www.mediprepa.com.
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